产品描述
【保存条件】
4ºC保存，有效期12个月
【概述】
血浆和血清含有极其复杂且高浓度的蛋白质（如白蛋白、免疫球蛋白）。本产品专为这种高复杂性样本设计，通过优化聚合物沉淀技术，实现从极少量血浆样本（低至100μL）中快速回收高纯度的外泌体，无需超速离心。
双重方案：提供蛋白酶K预处理方案，显著降低杂蛋白干扰，提高下游实验效果。
极速分离：孵育时间缩短至10-30min，远快于传统超速离心提取方法。
高灵活性：兼容人及常见实验动物（小鼠、大鼠等）的血清与血浆。
【操作方法】
I: 样品准备：
1. 取出血浆样品并置于冰上。如果样品是冷冻的，将样品在25-37°C的温度下水浴解冻直到完全变成液体，然后放在冰上直到下面操作开始。
2. 室温下以2000×g离心血浆样品20分钟以去除细胞和碎片。
3. 在不干扰沉淀的情况下将部分澄清的上清液血浆转移到新离心管中。
4. 在室温条件下将新离心管以 10,000×g 离心 20 分钟以去除杂质。
5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新管中，不要干扰沉淀，并将其置于冰上，直到准备好进行分离
6. 继续步骤“外泌体分离（用蛋白酶处理）”或“外泌体分离（无蛋白酶处理）”。
IIA:外泌体分离（用蛋白酶处理）：
建议使用蛋白酶 K处理以去除大部分血浆中蛋白质，但它可能导致部分暴露在外泌体表面的蛋白质降解（可能蛋白浓度会降低），若这与您的研究内容有冲突，可选择“分离外泌体（未经蛋白酶处理）操作步骤。
1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积1×PBS。
2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。
3. 向样品中加入 0.05 倍体积的蛋白酶 K。例如：对于100µl起始体积的血浆，加入5µl蛋白酶 K 溶液。
4. 涡旋样品，将溶液试管置于37℃下孵育10分钟。
5. 加入 0.2 倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。
总体积=血浆+PBS | 血浆外泌体提取试剂 |
100µl+50µl | 30µl |
1ml+0.5ml | 300µl |
6. 充分混合经蛋白酶 K处理的血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或倒置直到溶液均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。）
7. 将样品在 2-8°C下孵育30分钟。
8. 孵育后，将样品在室温下以10,000×g离心5分钟。（注意：对于小鼠血浆，在4°C下离心30分钟。）
9. 通过移液器吸出上清液并丢弃，此时外泌体包含在试管底部的颗粒中。
10. （可选步骤）再次以10,000×g转速离心试管30秒收集任何可能残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液。
11. 继续“外泌体重悬”步骤
IIB: 外泌体分离（无蛋白酶处理）：
1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入 0.5 倍体积1×PBS。
2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。
3. 加入0.2倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。
总体积=血浆+PBS | 血浆外泌体提取试剂 |
100µl+50µl | 30µl |
1ml+0.5ml | 300µl |
4. 充分混合血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或吹打直到溶液彻底均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。）
5. 将样品在室温下孵育10分钟。
6. 孵育后，将样品在室温下以10,000 × g离心5分钟
7. 通过移液器吸出上清液并丢弃，外泌体包含在试管底部的颗粒中。
8. （可选步骤）再次以 10,000×g 离心管 30 秒收集任何残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液
9. 继续“外泌体重悬”步骤
III: 外泌体重悬
1. 将 1×PBS 或类似缓冲液添加到颗粒中并上下涡旋或吸管以重悬外泌体。
起始血浆体积 | 重悬体积 |
100µl | 25-50µl |
1ml | 100-500µl |
2. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化
3. 提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存
【注意事项】
1. 血浆分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃都会对产量有一定的影响。
2. 本品仅限用于科研实验
产品规格
- 货期
- 现货
- 规格
- 50ml、100ml
存储条件
4ºC保存
常见问题 (FAQ)
提取的外泌体如何保存？
提取的外泌体：2–8℃ 中保存 1 周或在 <-20℃ 中长期保存。说明书警告：血浆分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃ 和 -80℃ 都会对产量有一定的影响。最佳实践：血浆采集后 30 min 内三重离心 → 立即提取外泌体 → 用 EK-5200 ExoStore 保存。
小鼠血浆的特殊离心条件？
说明书原文：对于小鼠血浆，在 4℃ 下离心 30 分钟。——小鼠血浆量小（每只 200–500 µL）、外泌体浓度相对低，需要更长时间和低温确保外泌体充分沉淀。注意：人血浆室温 5 min 即可，不要混淆。
可用于哪些应用场景？
适用：① 液体活检（外泌体 miRNA 疾病标志物）；② 肿瘤外泌体研究（HCC、胰腺癌、肺癌等）；③ 多中心临床研究（仅需血浆 100 µL 起始）；④ 小鼠模型研究（小鼠血浆 4℃ 离心特殊条件）；⑤ 外泌体 miRNA 高阶分析（搭配 EK-1318/EK-1322）；⑥ 临床转化研究（疾病早筛、预后判断）。
肝素抗凝的禁忌？
血浆外泌体研究禁用肝素抗凝管——肝素抑制下游 RT-PCR 反应。推荐：EDTA 或柠檬酸钠抗凝管。血清 vs 血浆：① 血浆（推荐）：cf-外泌体含量略低但更接近真实循环；② 血清：处理简单但凝血过程释放血小板/红细胞内源外泌体增加变异。双重离心：血浆采集后 30 min 内三重离心（300×g 去细胞 + 2,000×g 去血小板 + 10,000×g 去微泡）后冻存。
完整流程参数（IIB 无蛋白酶K处理）？
说明书规范：① 取澄清上清液至新管 + 0.5 倍体积 1×PBS；② 涡旋混匀；③ 加 0.2 倍体积血浆外泌体提取试剂；④ 涡旋至均匀（轻微混浊属正常）；⑤ 室温孵育 10 min；⑥ 室温 10,000×g 离心 5 min；⑦ 弃上清，外泌体在管底沉淀；⑧ （可选）10,000×g 30 s 收集残留；⑨ PBS 重悬。——比 IIA 路径少蛋白酶处理 + 30 min 孵育，更省时。
完整流程参数（IIA 蛋白酶 K 处理）？
说明书规范：① 取澄清上清液至新管 + 0.5 倍体积 1×PBS；② 涡旋混匀；③ 加 0.05 倍体积蛋白酶 K（如 100 µL 血浆 + 5 µL 8K）；④ 涡旋后37℃ 孵育 10 min；⑤ 加 0.2 倍体积血浆外泌体提取试剂（总体积 = 血浆 + PBS）；⑥ 涡旋至均匀（轻微混浊属正常）；⑦ 2–8℃ 孵育 30 min；⑧ 室温 10,000×g 离心 5 min（小鼠血浆改为 4℃ 离心 30 min）；⑨ 弃上清，外泌体在管底沉淀；⑩ （可选）10,000×g 30 s 收集残留试剂，吸弃；⑪ PBS 重悬。
蛋白酶 K 预处理的两种路径？
说明书提供两种方案：① IIA：蛋白酶 K 处理——建议使用蛋白酶 K 处理以去除大部分血浆中蛋白质，但它可能导致部分暴露在外泌体表面的蛋白质降解（可能蛋白浓度会降低）；适合下游 RNA 提取或不需外泌体表面蛋白的应用；② IIB：无蛋白酶处理——保留外泌体表面蛋白完整性，适合 WB 检测 CD9/CD63/CD81 等表面标志物。选择：① 做 RNA-seq →蛋白酶 K 处理（IIA）；② 做 WB / 表面蛋白研究 → 无需蛋白酶 K处理（IIB）。
起始量与样品准备？
① 取出血浆样品置于冰上；如样品冷冻，25–37℃ 水浴解冻直到完全液化，然后冰上保存；② 室温 2,000×g 离心 20 min 去除细胞和碎片；③ 转移澄清上清液（不干扰沉淀）；④ 室温 10,000×g 离心 20 min 去除杂质；⑤ 转移澄清上清液冰上备用。
本产品的核心特点？
血浆和血清含有极其复杂且高浓度的蛋白质（如白蛋白、免疫球蛋白）。本产品专为这种高复杂性样本设计，通过优化聚合物沉淀技术，实现从极少量血浆样本（低至 100 µL）中快速回收高纯度的外泌体，无需超速离心。双重方案：提供蛋白酶 K 预处理方案，显著降低杂蛋白干扰，提高下游实验效果。极速分离：孵育时间短，远快于传统超速离心提取方法。高灵活性：兼容人及常见实验动物（小鼠、大鼠等）的血清与血浆。
