EK-1320 FastPure 血清/血浆RNA提取试剂盒

产品介绍

本试剂盒是最新一代的无毒无酚提取RNA的方法，可以快速地从血浆及血清中提取包括miRNA在内的无细胞总RNA。本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品级化妆品等用途。

存储条件

试剂室温干燥保存可至少稳定12个月

需要额外准备的材料

1. 100%异丙醇

2. 无水乙醇

3. 80%乙醇（RNase-free水配制）

4. 无RNase酶的1.5ml/2ml离心管

5. 无RNase酶的吸头

6. 干净的手套

7. 高速离心机

开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. Buffer ML2和Buffer RWT作为浓缩液提供可能会形成沉淀，如果有沉淀出现请37-56℃加热溶解后室温使用。

2. Buffer RWT作为浓缩液提供，在第一次使用前加入2倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。

3. Buffer RPE作为浓缩液提供，在第一次使用前加入4倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。

4. RNase-free水中不含任何抑菌因子，室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染，使用时尽量注意，推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。

5. 若要处理冷冻血清/血浆样品，请在37°C 的水浴中孵育，直到样品完全解冻并溶解。尽量避免长时间孵育，否则可能会损害RNA的完整性。

操作步骤：

1. 准备血清或血浆或解冻冷冻样品。

注意：样本最优是新鲜获取，或者-80℃储存；长时间样本即使-80℃储存亦有降解的风险与可能。不应使用含有肝素抗凝剂的样本，可能会影响下游RT-PCR反应结果。

2. 将200μl血清或血浆转移到1.5/2ml无酶离心管中。

注意：若需要提取更多体积的样本，后续试剂按比例增加。建议使用1.5ml尖底离心管更有利于沉淀聚集。

3. 加入100μl Buffer ML2，关闭管盖并涡旋>5秒。在室温下孵育3-5分钟。

注意：可以通过涡旋振荡并在室温下孵育3分钟来促进样品裂解，若无条件静置亦可。

4. 加入30μl Buffer RP1，关闭管盖并通过涡旋剧烈混合>20秒。在室温下孵育3分钟。

注意：彻底混合对于后续的相分离很重要。Buffer RP1加入后产生沉淀为正常现象。

5. 在室温下以12000×g离心3分钟。

注意：上清液应为透明无色。

6. 取上清液（约280μl）转移到新的离心管中。

注意：注意勿吸取到沉淀，沉淀为蛋白质复合物。

7. 加入1倍体积异丙醇，涡旋10-20秒充分混匀。

注意：加入1倍体积异丙醇更有助于micoRNA提取，如280μl上清则加入280μl异丙醇。

8. 将全部样品转移到RNA吸附柱中。盖上盖子，以≥8000×g离心15-30秒。丢弃滤液。

9. 将700μl Buffer RWT（使用前请确认Buffer RWT是否按要求加入2倍体积无水乙醇）加入到RNA吸附柱中。盖上盖子，以≥8000×g离心15-30秒。丢弃滤液。

10. 将500μl Buffer RPE （使用前请确认Buffer RPE是否按要求加入4倍体积无水乙醇）加入到RNA吸附柱中。盖上盖子，以≥8000×g离心15-30秒。丢弃流出物。

11. 向RNA吸附柱中加入500μl 80%乙醇。盖上盖子，以≥8000×g离心2分钟。丢弃滤液。

注意：RNA吸附柱内柱取出倒滤液时注意不要接触滤液，防止乙醇残留影响后续结果。

12. 将RNA吸附柱内柱放回收集管中。打开离心柱的盖子，最大转速≥12000×g离心3-5分钟以干燥柱膜。丢弃滤液和收集管。

注意：最大转速应不低于12,000×g

13. 将RNA吸附柱内柱转入新的无酶1.5ml离心管中，并置于无酶的环境中开盖静置5-10min至乙醇晾干。

注意：干燥离心柱膜很重要，因为残留的乙醇可能会干扰下游反应

14. 向吸附柱膜正中央加入20-30μl RNase-free Water，盖上盖子并静置1-2分钟。后置于离心机中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 离心3min得到RNA溶液。

注意：如果需要更高的RNA浓度，可适当减少RNase-free water洗脱，但离心下来的体积可能会降低导致总产量降低，因为离心柱膜不能充分水合。洗脱液洗脱后的RNA溶液应置于-80℃储存。