ES-8153 4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液（DTT）

【保存条件】

-20℃保存，有效期1年

【概述】

4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。

上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。

【使用建议】

1. 室温解冻4×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液。

2. 请按每30μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。

3. 混匀后，95-100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。

4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟（离心为了减少可能产生的沉淀，若无沉淀可不离心直接上样），取上清直接上样电泳即可。

【注意事项】

1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右，胶浓度为12%时约在20kd左右，胶浓度为15%时大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。

4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、派洛宁Y指示剂，pH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色不影响产品使用。

5. 一般而言，派洛宁Y的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，派洛宁Y染料的迁移速度比溴酚蓝慢。