EK-5110 HiTrans 磷酸钙转染试剂盒

【保存条件】

-20℃保存，一年有效 

【概述】

HiTrans磷酸钙法细胞转染试剂盒(HiTrans Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)，在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性。用磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。

HEK293或HEK293T细胞，即通常所谓的293细胞，是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达90%以上；通常很容易达到40-50%左右的转染效率。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染，但效率比293细胞要略低一些。本试剂盒不仅适合于大多数贴壁细胞的转染，也适用于一些悬浮细胞的转染。
本试剂盒内提供的试剂都经无菌处理，可以直接使用。

已验证可使用的细胞系包括：HEK293T、Hela、CHO K1、BAEC、肠黑素瘤细胞、COS-7、成纤维细胞（人胚胎、新皮肤）、HEK293、Huh7、IMR-90、LLC（Lewis肺癌）、NIH3T3、PC-12、PCI-13、SH-SY5Y、SK-HEP-1、T47D等。

【操作方法】

A. 对于贴壁细胞（以6孔板为例）：

1. 将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后1-2天内长到70-80%满为宜。后续说明都按6孔板内一个孔进行说明，如果有更多个孔或大小不相同的培养器皿，请自行换算。

2. 在转染前30-60分钟，吸去细胞培养液，加入新鲜的不含抗生素的完全培养液2毫升。注意：转染时最好使用新鲜配制且pH值经过精心调校的培养液；转染用的培养液可以在配制后分装冻存，使用时再解冻。

3. 取2-6微克待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20微升)，加入到100微升氯化钙溶液中，混匀。

4. 把DNA-氯化钙溶液加入到100微升磷酸钙转染缓冲液中，混匀，室温孵育10-20分钟。此时不会产生可见的沉淀。

5. 把DNA-氯化钙-BBS混合物均匀滴加到整个6孔板内。在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。

6. 根据实验要求和磷酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16小时后轻轻晃动培养板数次以充分悬浮一些磷酸钙沉淀，吸去含磷酸钙沉淀的培养液，加入2毫升新鲜的完全培养液，继续培养。

7. 通常在转染约24小时后就可以检测到转染基因的表达。

B. 对于悬浮细胞：

1. 离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。

2. 按照上面的步骤3)和4)制备DNA-氯化钙-磷酸钙转染缓冲液混合物。

3. 每10⁶个细胞的沉淀，用100微升DNA-氯化钙-磷酸钙转染缓冲液混合物重新悬浮，室温放置20分钟。

4. 在一个6孔板孔内加入2毫升完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-DNA-氯化钙-BBS混合物，混匀。

5. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。

6. 根据实验要求和磷酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16小时后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培养液重新悬浮细胞，继续培养。

7. 通常在转染约24小时后就可以检测到转染基因的表达。

【注意事项】

1. 转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到磷酸钙转染缓冲液中，不要把磷酸钙转染缓冲液加入到DNA-氯化钙溶液中。

2. 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。

3. 转染时由于质粒不同、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。

4. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。

5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。